Stroma-free, serum-free differentiation and expansion of hematopoietic stem and progenitor cells to the T cell lineage
Notice bibliographique
Résumé
Abstract T cells are produced by the differentiation of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) into Lin− CD34+ CD7+ progenitors that migrate from the bone marrow (BM) to the thymus where further T cell development takes place. The differentiation of HSPCs into T cells can be supported in vitro by using OP9 stromal cells that express a Notch ligand. We have developed a more simple stroma-free culture method that promotes the expansion and differentiation of T cell progenitors from purified CD34+ HSPCs and purified multipotent lymphoid progenitors (MLPs) from cord blood (CB) or BM. CD34+ CB cells isolated using EasySep magnetic separation or CD34+ CD38− CD90− CD45RA+ MLPs further purified by cell sorting were seeded into culture plates coated with an attachment substrate containing Notch ligand and cultured in serum-free StemSpan SFEM II medium in the presence of a cytokine supplement containing SCF, TPO, Flt3L and IL-7. After 3 weeks, CD7+ CD5+ proT cells were detected at a frequency of 84% (range: 63–97%, n=26) with a proT cell yield of 2,130 (142–5,970, n=26) per initial CD34+ cell and 28,110 (4,720–63,930, n=4) per MLP initially seeded. In these cultures 28% (12–43%, n=12) of CD7+ cells also expressed CD1a, indicating further differentiation into preT cells. The pro and preT cells could mature into CD4+ CD8+ double positive T cells (38%; 24–64%, n=6) and TCRαβ+ CD3+ T cells (12%; 5–23%) over two weeks of continued culture in the same medium and in the presence of OP9-DL1 stromal cells. These results demonstrate that HSPCs can expand and differentiate into pro and preT cells under stroma-free and serum-free culture conditions. This novel culture system may benefit research and development of immunotherapies where large numbers of T cells are required.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».