Ex Vivo Phenotyping and Potency Monitoring of CD19 CAR T Cells With a combined Flow Cytometry and Impedance-based Real-Time Cell Analysis Workflow
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Cancer immunotherapy is increasingly utilized for cancer treatment. CARs (Chimeric antigen receptors) targeting CD19 have produced strong antitumor responses in hematologic malignancies, but tumor regression has seldom occurred when CARs targeting other antigens. The state of T-cell differentiation and T cell exhaustion influences the engraftment and persistence of CAR-expressing T cells following adoptive transfer. Here we report the use of a combined impendence-based Real-Time Cell Analysis (RTCA) and flow cytometry cell analysis workflow for ex vivo cytolytic potency monitoring of CD19 CAR T cell, as well as the examination of phenotypic and functional responses to antigen exposure over time. CD19 CAR T cell killing of HEK293 CD19 with different E:T ratio was monitored by RTCA system. Cytokine productions were measured by NovoCyte® Quanteon™ flow cytometer after 24 hrs. Co-incubation with HEK293 CD19, phenotypic and functional responses of CD19 CAR T cells towards exposure of different antigen levels were systematically examined over time. Both assays reveal that the CD19 CAR T cells show high dose-dependent killing activities against HEK293 CD19 but not against HEK293. Using the multi-color Flow Cytometry immunophenotyping, CD4 dim and CD8 dim populations are identified as effective killing cells which are enriched in central memory (CD45RA+CCR7−) cells while normal CD4+ or CD8+ T cells consist of predominant naïve-like (CD45RA+CCR7+) T cells after co-incubation with HEK293 CD19 cells. Exhaustion marker (PD-1, LAG-3, TIM-3) are overexpressed in normal CD4+ and CD8+ populations but not in CD4 dim and CD8 dim populations with CD19 antigen exposure. After antigen exposure, T cell activation levels change significantly.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».