Imaged capillary isoelectric focusing employing fluorocarbon and methylcellulose coated fused silica capillary for characterization of charge heterogeneity of protein biopharmaceuticals
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Identifying and characterizing charge heterogeneity is essential for the successful development and production of biopharmaceuticals. Imaged capillary isoelectric focusing technology based on isoelectric point differentiation has been becoming the gold standard of quality and manufactory process control in the biopharmaceutical industry due to its high‐resolution characterization of protein charge variants with high throughput. Fluorocarbon‐coated capillaries are widely used in the imaged capillary isoelectric focusing to suppress the electroosmotic flow and minimize the protein adsorption onto the fused silica capillary inner surface. Additionally, polymers such as methylcellulose are usually added to the sample solution to serve as a dynamic capillary coating that improves the peak shape and resolution during the imaged capillary isoelectric focusing separation, especially for complex proteins. However, the addition of methylcellulose tends to result in tedious operation, “spike peaks” from bubble generation, and frequent capillary blockage during the imaged capillary isoelectric focusing separation. In addition, methylcellulose is not compatible with mass spectrometry and easily produces the contamination of mass spectrometry ion source when carrying out imaged capillary isoelectric focusing—mass spectrometry direct coupling. Recently, a new imaged capillary isoelectric focusing method was developed employing a methylcellulose‐coated capillary cartridge, to avoid the addition of methylcellulose which is then present throughout the whole analysis. When applied to protein drug characterization the established imaged capillary isoelectric focusing method demonstrated high repeatability, stable coatings, outstanding separation efficiency, and excellent isoelectric point differentiation. In addition, we compared imaged capillary isoelectric focusing separation using the methylcellulose‐coated capillary with that utilizing the routinely coated capillary such as fluorocarbon, illustrating that methylcellulose coating provided consistent results and could be seamlessly integrated into an existing drug discovery process. Finally, the methylcellulose‐coated fused silica capillary was applied to imaged capillary isoelectric focusing—mass spectrometry for characterizing protein charge variants allowing reliable identification of mass spectrometry after imaged capillary isoelectric focusing separation. This can greatly simplify the operation steps and prevent the contamination of mass spectrometry ion source that often results from using routinely coated capillaries ultimately making this an essential innovation of imaged capillary isoelectric focusing—mass spectrometry that greatly improves the imaged capillary isoelectric focusing compatibility with mass spectrometry.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».