A17 EVIDENCE OF PROTEASE-MEDIATED PRO-NOCICEPTIVE EFFECTS OF FECAL SUPERNATANTS FROM CROHN'S DISEASE PATIENTS
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Background Abdominal pain is a debilitating symptom of Crohn’s disease (CD). Despite the current treatment options for this disease, abdominal pain is an unresolved problem that commonly persists in the absence of active inflammation. This suggests that something other than inflammation is driving the pain during the quiescent phase. We have previously reported that microbial proteases can directly modulate the excitability of dorsal root ganglia (DRG) neurons, many of which are pain-sensing. We hypothesize that luminal proteases of CD patients are contributing to their abdominal pain. Purpose Determine whether luminal mediators in CD fecal samples induce changes in pain signalling. Method The effects of patient (active CD [n = 3] and healthy volunteer (HV) [n = 3]) fecal supernatant (FS) samples on pain-sensing neurons were assessed using ex-vivo single unit afferent nerve recordings from mouse colons. Each sample was tested in colonic preparations from a least 5 mice. To further examine cellular mechanisms, DRG neurons were isolated and incubated overnight in media containing CD FS or HV FS media. Changes in neuronal excitability were recorded by determining the rheobase (lower rheobase=increased excitability) using patch clamp recordings (n ≥ 9 DRG neurons/group). Protease inhibitors were applied in both bioassays to determine whether these inhibited the excitatory effect of FS. Lastly, total proteolytic activity in the CD and HV fecal samples was calculated using a casein colorimetric protease detection assay. Result(s) FS from HV had no effect on afferent nerve excitability (p = 0.8920). FS from active CD patients increased action potential discharge from colonic afferent nerves by 85% (p<0.0001) and selectively increased the activation of high-threshold units, which are putative nociceptors, by 44% (p=0.0074). A protease inhibitor cocktail (1:1000) and protease-activated receptor (PAR)-2 antagonist GB83 (10µM) both blocked the excitatory effects of CD FS (p<0.05). Overnight incubation with CD FS also had an excitatory effect on DRG neurons compared to HV FS (rheobase decreased by 46%, p<0.05). The effect of CD FS was blocked by GB83 (10µM) (p<0.001) and a serine protease inhibitor (FUT175; 100µM) (p<0.05) independently, but the activity was not blocked by E64 (30nM) a cysteine protease inhibitor. A 200-fold increase (p<0.0001) in total proteolytic activity was found in CD FS compared to HV FS. Conclusion(s) Luminal serine proteases, but not cysteine proteases, appear to be driving nociceptive signalling in CD patients. This provides insight into the generation of pain in CD patients and may be a potential target to mitigate this action. Further research is required to elucidate whether these pro-nociceptive proteases are of bacterial or host origin and their effects in the quiescent phase. Disclosure of Interest None Declared
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,004 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».