A Flexible Transgene Integration ‘Landing-Pad’ Toolkit in Human Induced Pluripotent Stem Cells Enables Facile Cellular Engineering, Gene Zygosity Control, and Parallel Transgene Integration
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Development of a repeatable method for delivering transgene payloads to human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) without risking unintended off-target effects is not fully realized. Yet, such methods are indispensable to fully unlocking the potential for applying synthetic biological approaches to regenerative medicine, delivering quantum impacts to cell-based therapeutics development. Here we present a toolkit for engineering hiPSCs centred on the development of two core ‘landing-pad’ cell-lines, facilitating rapid high-efficiency delivery of transgenes to the AAVS1 safe-harbour locus using the Bxb1 large-serine recombinase. We developed two landing-pad cell lines expressing green and red fluorescent reporters respectively, both retaining stemness whilst fully capable of differentiation into all three germ layers. A fully selected hiPSC population can be isolated within 1-2 weeks after landing-pad recombinase-mediated cassette exchange. We demonstrate the capability for investigator-controlled homozygous or heterozygous transgene configurations in these cells. As such, the toolkit of vectors and protocols associated with this landing-pad hiPSC system has the potential to accelerate engineering workflows for researchers in a variety of disciplines.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».