Efficient <scp>CRISPR</scp> /Cas9 mediated large insertions using long single‐stranded oligonucleotide donors in <i>C. elegans</i>
Notice bibliographique
Résumé
Highly efficient generation of deletions, substitutions, and small insertions (up to ~ 150 bp) into the Caenorhabditis elegans genome by CRISPR/Cas9 has been facilitated by the use of single-stranded oligonucleotide donors as repair templates. However, insertion of larger sequences such as fluorescent markers and other functional domains remains challenging due to uncertainty of optimal performance between single-stranded or double-stranded repair templates and labor-intensive as well as inefficient protocols for their preparations. Here, we simplify the generation of long ssDNA as donors in CRISPR/Cas9. High yields of ssDNA can be rapidly generated using a standard PCR followed by a single enzymatic digest with lambda exonuclease. Comparison of long ssDNA donors obtained using this method to dsDNA demonstrates orders of magnitude increased insertion frequency for ssDNA donors. This can be leveraged to simultaneously generate multiple large insertions as well as successful edits without the use of selection or co-conversion (co-CRISPR) markers when necessary. Our approach complements the CRISPR/Cas9 toolkit for C. elegans to enable highly efficient insertion of longer sequences with a simple, standardized, and labor-minimal protocol.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».