Sublimation application of 5‐chloro‐2‐mercaptobenzothiazole matrix for matrix‐assisted laser desorption/ionization mass spectrometry imaging of mouse kidney
Notice bibliographique
Résumé
RATIONALE: Sublimation is a solvent-free technique used to apply a uniform matrix coating over a large sample plate, improving the matrix's purity and enhancing the analyte signal. Although the 5-chloro-2-mercaptobenzothiazole (CMBT) matrix was introduced years ago, there are no reports of its application via sublimation. We investigated the experimental parameters that are optimal for CMBT matrix sublimation on mouse kidney samples. We also evaluated the stability of the sublimed CMBT matrix under a vacuum environment. Using kidney samples prepared with a sublimated CMBT matrix, we conducted matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) mass spectrometry imaging (MSI) analysis of specific phospholipids (phosphatidylcholine and phosphatidylglycerol in the positive ion mode and phosphatidylinositol in the negative ion mode). We also explored various spatial resolutions (50, 20, and 10 μm) and performed sequential MALDI-hematoxylin and eosin (H&E) staining. METHODS: The CMBT matrix was applied to kidney samples using a sublimation apparatus connected to a vacuum pump to achieve a pressure of 0.05 Torr. The matrix was then subjected to different temperatures and sublimation times to determine the optimal conditions for matrix application. Subsequently, a Q-Exactive mass spectrometer equipped with a Spectroglyph MALDI ion source was employed for MALDI-MSI experiments. Standard protocols were followed for H&E staining after MALDI analysis. RESULTS: yielded high-quality images. The sublimated matrix exhibited minimal loss after approximately 20 h of exposure to a vacuum of 7 Torr, indicating its stability under these conditions. Ion images were successfully obtained at spatial resolutions of 50, 20, and 10 μm. Furthermore, orthogonal histological information was obtained through sequential MALDI-H&E staining. CONCLUSIONS: We demonstrate that samples prepared for MALDI-MSI using sublimation to apply the CMBT matrix yield high-quality mass spectrometric images of mouse kidney sections. We also provide data for the impact of various experimental parameters on image quality (e.g., temperature, time, matrix thickness, and spatial resolution).
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».