Comparison of Two Human Skin Cell Isolation Protocols and Their Influence on Keratinocyte and Fibroblast Culture
Notice bibliographique
Résumé
For the development of advanced therapies, the use of primary cells instead of cell lines is preferred. The manufacture of human tissue-engineered skin substitutes requires efficient isolation and culture protocols allowing a massive expansion of the cells in culture from an initial specimen of a minimal size. This study compared two skin cell isolation protocols, routinely applied in two clinical laboratories. Epithelial (keratinocytes) and dermal (fibroblasts) cells were isolated and cultured from three human skin biopsies (N = 3). The two-step digestion protocol (LOEX-Protocol) firstly used thermolysin to enzymatically disrupt the dermal–epidermal junction while, for the one-step digestion protocol (UPCIT-Protocol), mechanical detachment with scissors was applied. Then, the epidermal and dermal layers were digested, respectively, to achieve cell isolation. The cell size, viability, yield and growth were analyzed over five passages (P). The colony-forming efficiency (CFE) and Keratin 19 (K19) expression of epithelial cells were also assessed after P0 and P1. Regarding the dermal cells, no significant differences were observed in the tested parameters of isolation and culture. However, for the epithelial cells, viability was higher (93% vs. 85%) and the number of cells extracted per cm2 of skin was 3.4 times higher using the LOEX-Protocol compared to the UPCIT-Protocol. No significant difference was observed for any parameter once the keratinocytes were cultured from P1 to P4. The CFE and K19 expression decreased from P0 to P1 in both protocols, probably due to the culture process. This study shows that both protocols enable the efficient isolation of skin dermal and epithelial cells and subsequent culture to produce grafts destined for the treatment of patients.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».