Development and validation of a liquid chromatography-tandem mass spectrometry assay to quantify plasma 24(S)-hydroxycholesterol and 27-hydroxycholesterol: A new approach integrating the concept of ion ratio
Notice bibliographique
Résumé
Accurate quantification of 24(S)-hydroxycholesterol and 27-hydroxycholesterol holds substantial biological significance due to their involvement in pivotal cellular processes, encompassing cholesterol homeostasis, inflammatory responses, neuronal signaling, and their potential as disease biomarkers. The plasma determination of these oxysterols is challenging considering their low concentrations and similarities in terms of empirical formulae, molecular structure, and physicochemical properties across all human endogenous plasma oxysterols. To overcome these sensitivity and specificity issues, we developed and validated a quantification method using liquid chromatography coupled to a tandem mass spectrometry instrument. Validation studies were designed inspired by Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) C62-A Guidelines. The linearity ranged between 20 and 300 nM for both oxysterols with limits of quantification at 20 nM and 30 nM for 24(S)-OHC and 27-OHC, respectively. Inter-day precision coefficient variations (CV) were lower than 10% for both oxysterols. An optimal separation of 25-OHC was obtained from 24(S)-OHC and 27-OHC with a resolution (Rs) > 1.25. The determination and validation of ion ratios for 24(S)-OHC and 27-OHC enabled another quality check in identifying interferents that could impact the quantification. Our developed and validated LC-MS/MS method allows consistent and reliable quantification of human plasmatic 24(S)-OHC and 27-OHC that is warranted in fundamental and clinical research projects.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,004 | 0,004 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».