MODL-26. A PROTOCOL TO ADAPT GLIOBLASTOMA IN VITRO CULTURE SYSTEMS INTO ORGANOID MODELS USING NEUROCULT™ NS-A PROLIFERATION MEDIUM
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Glioblastoma (GBM) is a malignant and aggressive brain tumor that is difficult to treat due to its heterogeneity. Traditional in vitro models (i.e. monolayers and tumorspheres) do not recapitulate this heterogeneity, leading to difficulty assessing new therapeutic strategies. Culturing GBM cells as organoids may provide a better method to retain the phenotype of the parent tumor. Here, we present a protocol for generating GBM organoids using NeuroCult™ NS-A Proliferation Medium, a medium commonly used for tumorsphere cultures. Two methods were assessed for the initial stage of formation, each suitable depending on throughput and cell source. In the first method, tumorspheres were dissociated and single cells were mixed with Growth Factor Reduced Matrigel® at a 1:4 ratio to form 15 μL droplets with 1000 cells per droplet. In the second method, 9000 cells from dissociated tumorspheres were seeded per well in a 96-well U-bottom plate and cultured for 5 days to form aggregates. On day 6, the aggregates were embedded in 15 μL Matrigel® droplets. In both methods, polymerized droplets were then cultured in suspension in stationary 6-well plates for 3 days, then maintained on an orbital shaker with full-medium changes every 2 - 3 days. Organoids were cryosectioned and processed for immunofluorescence at 5 - 6 weeks. In vivo, GBM tumors display an architecture containing regions of high and low nutrient and oxygen availability around a necrotic core. GBM organoids generated using this protocol exhibited distinct areas of proliferation near the organoid rim (Ki67+) and hypoxia (CA9+) near the core, mimicking this in vivo architecture (n = 3 GBM cell lines). Organoids grew to 2 - 4 mm in diameter and expressed glioma markers including TUJ1, Nestin, SOX2, OLIG2, and GFAP. These data show that NeuroCult™ NS-A Proliferation Medium can be used to adapt traditional GBM culture systems into organoids.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,002 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,003 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,011 | 0,014 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».