Evidence of an intracellular creatine-sensing mechanism that modulates creatine biosynthesis via AGAT expression in human HAP1 cells
Notice bibliographique
Résumé
Cellular homeostasis of creatine (CT), integral part of the energy buffering and transducing system connecting intracellular sites of ATP production and utilization, comprises of mechanisms that increase CT, i.e., biosynthesis and cellular uptake, and CT-lowering processes, such as export and non-enzymatic conversion to creatinine. The biosynthesis of CT is controlled by negative feedback loop via suppression of the rate-limiting enzyme arginine:glycine amidinotransferase (AGAT). Although the regulatory mechanism involved is not well understood, AGAT suppression is successfully used in patients with guanidinoacetate methyltransferase (GAMT) deficiency to reduce the neurotoxic accumulation of the AGAT-mediated guanidinoacetate production by supplementing patients with CT. Utilizing the CT-dependent feedback loop for the upregulation of AGAT expression may well represent a therapeutic target for an additional CT deficiency syndrome, the CT transporter (CrT) defect, for which no effective treatment option is available so far. We have used CRISPR to tag the C-terminus of AGAT with a nanoluc luciferase (NLuc) reporter in HAP1 cells. A biphasic decay of AGAT-NLuc in response to increasing extracellular CT was observed, whereas the decrease in AGAT-NLuc expression was directly proportional to the rise in intracellular CT levels with an approximate IC50 of 1-2 mM. CRISPR generated HAP1 CrT null cells and HAP1 CrT null cells stably expressing a CrT-GFP fusion protein further demonstrated that the biphasic response to extracellular CT is mediated by a high-affinity (Km 9-10 µM) CrT dependent, saturable mechanism and a CrT independent, unsaturable uptake process. The direct response to intracellular CT suggests the existence of an intracellular CT sensing system enabling a dynamic cell response to changing CT concentration that is relevant for cellular CT homeostasis.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».