Adaptation of Magnified Analysis of the Proteome for Excitatory Synaptic Proteins in Varied Samples and Evaluation of Cell Type-Specific Distributions
Notice bibliographique
Résumé
Growing evidence suggests a remarkable diversity and complexity in the molecular composition of synapses, forming the basis for the brain to execute complex behaviors. Hence, there is considerable interest in visualizing the spatial distribution of such molecular diversity at individual synapses within intact brain circuits. Yet this task presents significant technical challenges. Expansion microscopy approaches have revolutionized our view of molecular anatomy. However, their use to study synapse-related questions outside of the labs developing them has been limited. Here we independently adapted a version of Magnified Analysis of the Proteome (MAP) and present a step-by-step protocol for visualizing over 40 synaptic proteins in brain circuits. Surprisingly, our findings show that the advantage of MAP over conventional immunolabeling was primarily due to improved antigen recognition and secondarily physical expansion. Furthermore, we demonstrated the versatile use of MAP in brains perfused with paraformaldehyde or fresh-fixed with formalin and in formalin-fixed paraffin-embedded tissue. These tests expand the potential applications of MAP to combinations with slice electrophysiology or clinical pathology specimens. Using male and female mice expressing YFP-ChR2 exclusively in interneurons, we revealed a distinct composition of AMPA and NMDA receptors and Shank family members at synapses on hippocampal interneurons versus on pyramidal neurons. Quantitative single synapse analyses yielded comprehensive cell type distributions of synaptic proteins and their relationships. These findings exemplify the value of the versatile adapted MAP procedure presented here as an accessible tool for the broad neuroscience community to unravel the complexity of the "synaptome" across brain circuits and disease states.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».