Detectability of Cytokine and Chemokine using ELISA, following Sample-inactivation using Triton X-100 or Heat
Notice bibliographique
Résumé
<title>Abstract</title> <italic><bold>Background </bold></italic> Routine characterization of clinical samples for their immunological responses against infectious pathogens often involves assessing cytokine/chemokine profiles and/or production of pathogen-specific antibodies. To prevent transmission of infectious materials in laboratories, these clinical samples are often inactivated by detergents or heat before the molecular assays are performed. Antibody-based molecular assays, such as ELISA, are highly sensitive to conformational changes in analytes. How specific inactivation procedures impact on cytokine/chemokine detectability in the clinical samples is not fully elucidated. This study compared two commonly used inactivation methods (Triton X-100, heat-inactivation) and untreated native samples in the cytokine/chemokine assays. <italic><bold>Method </bold></italic> Plasma, endotracheal tube aspirate (ETTA), and nasopharyngeal (NP) samples underwent inactivation with 0.05% Triton X-100 or heat (60°C, 1 hour). Cytokines/chemokine levels were assessed using Meso-Scale-Multi-Spot assays. Data were analyzed against untreated samples using one-way and Tukey’s multiple comparisons tests. Additionally, the conformational instability of cytokines/chemokines, predicted by their amino acid sequence, was examined to determine its contribution to detectability in inactivated samples. <italic><bold>Results </bold></italic> Heat treatment significantly impacted cytokine/chemokine detection across sample types. IL-1α levels were substantially reduced in ETTA, NP, and plasma samples. In heat-inactivated plasma, IL-12p40, IL-15, IL-16, VEGF, IL-7, and TNF-β, among 36 cytokines, were reduced by 33-99% (p-values ≤0.02). Conversely, Triton X-100 minimally affected cytokine/chemokine detection in plasma and NP samples by 11-37% (p-values ≤0.04). Triton X-100 increased the detection of IL-15, IL-16, IL-1α, VEGF, and IL-7 levels in NP samples. Triton X-100-inactivated ETTA samples showed no significant impact on cytokine/chemokine detectability. Heat inactivation had more profound impacts on protein detectability. Structural analysis revealed heat-affected cytokines had more hydrophobic residues and higher instability indices, although protein features alone could not reliably predict susceptibility. <italic><bold>Conclusion </bold></italic> Our findings demonstrated the importance of empirical assessments of inactivation protocols in the measurements of cytokine/chemokine responses in clinical samples. Overall, Triton X-100 performed better than heat inactivation in preserving protein conformation for antibodies-based immunological studies.
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Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
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Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».