Genetically engineered human embryonic kidney cells as a novel vehicle for dual patch clamp study of human gap junction channels
Notice bibliographique
Résumé
Mutations in more than half of human connexin genes encoding gap junction (GJ) subunits have been linked to inherited human diseases. Functional studies of human GJ channels are essential for revealing mechanistic insights into the etiology of disease-linked connexin mutants. However, the commonly used Xenopus oocytes, N2A, HeLa, and other model cells for recombinant expression of human connexins have different and significant limitations. Here we developed a human cell line (HEK293) with each of the endogenous connexins (Cx43 and Cx45) knocked out using the CRISPR-Cas9 system. Double knockout HEK293 cells showed no background GJ coupling, were easily transfected with several human connexin genes (such as those encoding Cx46, Cx50, Cx37, Cx45, Cx26, and Cx36) which successfully formed functional GJs and were readily accessible for dual patch clamp analysis. Single knockout Cx43 or Cx45 HEK cell lines could also be used to characterize human GJ channels formed by Cx45 or Cx43, respectively, with an expression level suitable for studying macroscopic and single channel GJ channel properties. A cardiac arrhythmia linked Cx45 mutant R184G failed to form functional GJs in DKO HEK293 cells with impaired localizations. These genetically engineered HEK293 cells are well suited for patch clamp study of human GJ channels.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».