A Direct CLIC5A/Ezrin Interaction Accounts for CLIC5A Plasma Membrane Localization and CLIC5A-Stimulated Rac1 Activation in Renal Glomeruli
Notice bibliographique
Résumé
Background: CLIC5A is part of the Podocalyxin/Ezrin complex at the apical domain of podocyte foot processes. Ezrin binds membrane phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2) inducing its activation and C-terminal (T567) phosphorylation. Activated Ezrin bridges membrane-spanning proteins to cortical actin, shaping the cellular architecture. We reported that CLIC5A stimulates Rac1-GTP-dependent PI(4,5)P2 generation and Ezrin activation and that CLIC5A deletion disrupts the foot process architecture (J. Cell Sci. 127:5164, 2014 & Kidney Int. 89:833, 2016). Here, we investigated the mechanism by which CLIC5A interacts with Ezrin. Methods: Direct protein-protein interactions were established by Yeast two-hybrid (Y2H) assay and confirmed by GST pull-down and reciprocal co-immunoprecipitation. Subcellular localization of endogenous proteins was determined by differential detergent fractionation of mouse glomeruli. Ezrin was released from glomerular membranes by stimulating phospholipase C-mediated PI(4,5)P2 hydrolysis with m-3M3FBS. Results: We found that CLIC5A interacts directly with the Ezrin C-terminal domain, but only if Ezrin was in the activated state. The extreme 16 C-terminal amino acids of Ezrin were necessary for the interaction and Ezrin phosphorylation at T567 increased CLIC5A binding. Expression of a C-terminal ezrin fragment (Ezrin 432-586, phosphomimic T567D), but not C-terminally truncated Ezrin 432-570 effectively blocked CLIC5A-stimulated Ezrin and Rac1 activation. In glomeruli 49 +/- 4 % of endogenous CLIC5A was in the cytoplasmic, 33 +/- 3% in membrane and 18 +/- 1 % in the cytoskeleton-associated fraction. As expected, PI(4,5)P2 hydrolysis reduced Ezrin phosphorylation and shifted Ezrin from membrane and cytoskeletal fractions into the soluble pool. Similarly, PI(4,5) P2 hydrolysis shifted CLIC5A from membrane- and cytoskeletal fractions, increasing the soluble component to 72 +/- 13% (p = 0.041, n= 3, mean +/- STD). Conclusions: CLIC5A interacts directly with active Ezrin, and this interaction is required for CLIC5A-dependent Rac1 activation. The release of CLIC5A together with Ezrin from the membrane fraction in response to PI(4,5)P2 hydrolysis suggests that CLIC5A localizes to the plasma membrane because of its direct interaction with Ezrin. Funding: Government Support - Non-U.S.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».