Development of a NanoBRET assay for evaluation of 14-3-3σ molecular glues
Notice bibliographique
Résumé
We report the development of a 384-well formatted NanoBRET assay to characterize molecular glues of 14-3-3/client interactions in living cells. The seven isoforms of 14-3-3 are dimeric hub proteins with diverse roles including transcription factor regulation and signal transduction. 14-3-3 interacts with hundreds of client proteins to regulate their function and is therefore an ideal therapeutic target when client selectivity can be achieved. We have developed the NanoBRET system for three 14-3-3σ client proteins CRAF, TAZ, and estrogen receptor α (ERα), which represent three specific binding modes. We have measured stabilization of 14-3-3σ/client complexes by molecular glues with EC 50 values between 100 nM and 1 μM in cells, which align with the EC 50 values calculated by fluorescence anisotropy in vitro. Developing this NanoBRET system for the hub protein 14-3-3σ allows for a streamlined approach, bypassing multiple optimization steps in the assay development process for other 14-3-3σ clients. The NanoBRET system allows for an assessment of PPI stabilization in a more physiologically relevant, cell-based environment using full-length proteins. The method is applicable to diverse protein-protein interactions (PPIs) and offers a robust platform to explore libraries of compounds for both PPI stabilizers and inhibitors.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».