8415 Rapid Generation Of An In Vivo Loss-Of-Function Genetic Model Of sdhb Zebrafish: Functional And Metabolic Characterization
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Disclosure: S. Parisien-La Salle: None. F. Nobilleau: None. J. Lamontagne: None. S. Éric: None. I. Bourdeau: None. Introduction: Animal research has been limited in pheochromocytomas and paragangliomas (PPGLs). Recently, Dona et al., described a sdhb mutated zebrafish model by introducing a 13 bp frameshift mutation at the sdhb exon1—intron1 boundary into the zebrafish sdhb gene that recapitulated features of PPGLs. Objective: To generate a new model of mutated sdhb zebrafish to further investigate the underlying metabolic and biochemical perturbations in vivo. Methods: We took advantage of the genetic accessibility of zebrafish embryo to generate loss-of-function model for sdhb using CRISPR/Cas9 technology. Three guide RNAs were designed and microinjected in one-cell stage zebrafish embryos to target the coding sequence of zebrafish sdhb gene. In order to control for the stress brought on by injections, we injected a group of zebrafish with Cas9 endonuclease as a control. At five days post fertilization, mutant and control zebrafish were flash frozen and sent for liquid chromatography mass spectrometry measurements of Krebs cycle metabolites and normetanephrines/metanephrines. All results were normalized to the control groups consisting of wild-type or Cas9 injected larvae. Sdhb expression was analyzed by RT-qPCR in sdhb mutants and wild-type zebrafish larvae. We also monitored survival and heart rate in sdhb mutant zebrafish, compared to wild-type and Cas9. Results: Firstly, we confirmed the significant reduction of sdhb expression in CRISPR-injected larvae compared to wild-type larvae at 5 dpf (0.0613 vs 1.000 p<0.0001). Our metabolic panel showed that succinate was up to 26 times more elevated in sdhb mutants than in wild-type fish extracts (sdhb: 26.51 p<0.0001). Lactate (sdhb: 5.27 p<0.0001), leucine (sdhb: 2.88 p<0.0001), arginine (sdhb: 1.50 p=0.0034) and HMG-CoA (sdhb: 1.36 p=0.0033) were also higher in sdhb mutants. Whereas aspartate (sdhb: 0.244 p<0.0001) and oxidized gluthiatone (sdhb: 0.64 p=0.0011) were significantly lower in sdhb mutants than in wild-types. In regards to functionality, normetanephrine and metanephrine levels were at least four folds higher in sdhb mutants than in Cas9 injected larvaes (4.06 p<0.0001 and 3.42 p<0.0001 respectively). Interestingly, this difference was more noticeable in the fish bathing medium than in larvae tissue extracts, suggesting an increased hormonal excretion (normetanephrines: 4.81 p<0.0001 and metanephrines: 9.40 p<0.0001). Finally, sdhb mutated zebrafish presented with a higher heart rate (148 vs 133 p<0.0001) and reduced lifespan (p<0.0001) when compared to the wild-type/Cas9 group. Conclusion: These findings confirm that the zebrafish is an ideal model for studying PPGLs and their associated genetic defects. Our approach allows the in vivo assessment of a large metabolic panel, opening avenues on new potential clinical metabolic biomarkers in a loss-of-function of the SDHB gene. Ref: Dona M, et al. Endocr Relat Cancer. 2021 Presentation: 6/1/2024
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,007 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».