Reduction of Background-Triggered Amplification in Lesion-Induced DNA Amplification (LIDA)
Notice bibliographique
Résumé
Lesion-induced DNA amplification (LIDA) enables isothermal amplification of nucleic acids, and the only enzyme required is T4 DNA ligase. However, the application of LIDA for the amplification of trace amounts of nucleic acids has been hindered by the observed background-triggered amplification in the absence of initial target due to a pseudo-blunt end ligation reaction of two of the primers. In this work, we have tested three approaches to minimize the background-triggered amplification: increasing and decreasing the concentration of salts such as NaCl and MgCl2, respectively, and increasing the concentration of ATP. All these optimizations sharply decreased the background-triggered amplification. Employing the most favourable buffer condition of 2.5 mM MgCl2 where the target-initiated amplification was least affected while reducing the background-triggered process enabled us to achieve a detection range of 14 nM-140 aM with an approximate limit of detection of 680 aM, which is six orders of magnitude more sensitive than using our standard amplification conditions. This optimization of the salt and co-factor concentrations to decrease background and enhance the sensitivity of LIDA has demonstrated LIDA’s potential for application in clinical diagnostics.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,004 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».