Crystallographic, kinetic, and calorimetric investigation of PKA interactions with L-type calcium channels and Rad GTPase
Notice bibliographique
Résumé
β-Adrenergic signaling activates cAMP-dependent PKA, which regulates the activity of L-type voltage-gated calcium channels such as Ca V 1.2. Several PKA target sites in the C-terminal tail of Ca V 1.2 have been identified, and their phosphorylation has been suggested to increase currents in specific tissues or heterologous expression systems. However, augmentation of Ca V 1.2 currents in the heart is instead mediated by phosphorylation of Rad, a small GTPase that can inhibit Ca V 1.2. It is unclear how each of the proposed target sites in Ca V 1.2 and Rad rank toward their recognition by PKA, which could reveal a preferential phosphorylation. Here, we used quantitative assays on three Ca V 1.2 and four Rad sites. Isothermal titration calorimetry and enzyme kinetics show that there are two Tiers of targets, with Ca V 1.2 residue Ser1981 and Rad residues Ser25 and Ser272 forming tier one substrates for PKA. These share a common feature with two Arginine residues at specific positions that can anchor the peptide into the substrate binding cleft of PKA. In contrast, PKA shows minimal activity for the other, tier two substrates, characterized by low k cat values and undetectable binding via isothermal titration calorimetry. The existence of two tiers suggests that PKA regulation of the Ca V 1.2 complex may occur in a graded fashion. We report crystal structures of the PKA catalytic subunit with and without a Ca V 1.2 and test the importance of several anchoring residues via mutagenesis. Different target sites utilize different anchors, highlighting the plasticity of PKAc to recognize substrates.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».