In silico studies of green fluorescent protein-tagged Hsp27-HPV16 E7 fusion protein and evaluation of cytokine secretion from antigen-presenting cells exposed to the fusion protein-carrying tumor-derived exosomes
Notice bibliographique
Résumé
Objective: Exosome (Exo)-based therapies have attracted considerable interest due to their potential as carriers for therapeutic molecules and their capacity to elicit anti-tumor immune responses. The objective of this study was to engineer TC-1 tumor cell line-derived exosomes with GFP-tagged heat shock protein (Hsp) 27-human papillomavirus (HPV)16 E7 fusion protein and evaluation of cytokine secretion from antigen-presenting cells (APCs: macrophages and dendritic cells) exposed to the engineered exosomes in vitro.Methods: In this study, different in silico methods were employed to evaluate the Hsp27-E7 and Hsp27-E7-GFP fusion proteins as potential vaccine candidates. Regarding to the in silico data, the Hsp27-E7-GFP fusion gene was subcloned into pCDH lentiviral vector for production of lentivirions harboring the Hsp27-E7-GFP fusion protein in eukaryotic cells. Subsequently, the TC-1 tumor cells were transduced with these lentivirions to isolate the engineered exosomes (i.e., Exo-Hsp27-E7-GFP) using the ExoQuick-TCTM kit and their characterization using physicochemical methods. Finally, the secretion of key cytokines (IFN-γ, TNF-α, and IL-10) was evaluated through incubation of antigen-presenting cells (APCs) with the engineered Exo-Hsp27-E7-GFP using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Results: Our in silico data showed that both the Hsp27-E7 and Hsp27-E7-GFP constructs were soluble and non-allergenic, and exhibited strong interaction with TLR4. Indeed, the linkage of GFP did not affect the physicochemical properties, and interaction of Hsp27-E7 with the immune receptors. Moreover, western blot analysis confirmed the presence of Hsp27-E7-GFP fusion protein in the isolated exosomes. The Exo-Hsp27-E7-GFP could significantly enhance the secretion of TNF-α and IL-10 from APCs compared to Exo and Exo-GFP, as well.Conclusions: These engineered vesicles derived from tumor cells demonstrate the capacity to induce effective immunity, suggesting their potential as a promising strategy in the development of cell-free vaccine candidates.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».