Human calpain-3 and its structural plasticity: Dissociation of a homohexamer into dimers on binding titin
Notice bibliographique
Résumé
-dependent cysteine protease abundant in skeletal muscle. Loss-of-function mutations in its single-copy gene cause a dystrophy of the limb-girdle muscles. These mutations, of which there are over 500 in humans, are spread all along this 94-kDa multidomain protein that includes three 40+-residue sequences (NS, IS1, and IS2). The latter sequences are unique to this calpain isoform and are hypersensitive to proteolysis. To investigate the whole enzyme structure and how mutations might affect its activity, we produced the proteolytically more stable 85-kDa calpain-3 ΔNS ΔIS1 form with a C129A inactivating mutation as a recombinant protein in Escherichia coli. During size-exclusion chromatography, this calpain-3 was consistently eluted as a much larger 0.5-MDa complex rather than the expected 170-kDa dimer. Its size, which was confirmed by SEC-MALS, Blue Native PAGE, and AUC, made the complex amenable to single-particle cryo-EM analysis. From two data sets, we obtained a 3.85-Å reconstruction map that shows the complex is a trimer of calpain-3 dimers with six penta-EF-hand domains at its core. Calpain-3 has been reported to bind the N2A region of the giant muscle protein titin. When this 37-kDa region of titin was co-expressed with calpain-3, the multimer was reduced to a 320-kDa particle, which appears to be the calpain dimer bound to several copies of the titin fragment. We suggest that newly synthesized calpain-3 is kept as an inactive hexamer until it binds the N2A region of titin in the sarcomere, whereupon it dissociates into functional dimers.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».