Identifying the regulatory cascade governing amyloid precursor protein macropinocytosis and subsequent production of amyloid‐beta
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Background Previously, we identified macropinocytosis as a novel mechanism for direct and rapid trafficking of cell surface APP to lysosomes, bypassing early and late endosomes. This process depends on the activity of Arf6 and several Rho‐GTPases, and inhibition of macropinocytosis reduces amyloid‐beta (Aβ) production. Macropinocytosis is relatively unstudied in neurons and neuronal cells. Based on data from neuronal and non‐neuronal cell types, we hypothesized that the crosslinking of APP at the cell surface recruits Fe65, which acts as a scaffold for the recruitment and activation of Arf6. Arf6 then recruits the Rho‐GTPases Rac1, Cdc42 and RhoA, resulting in APP internalization by macropinocytosis and its cleavage to Aβ within the lysosome. Methods Neuro2a (N2a) neuronal cells or human IPSC‐derived primary cortical neurons were transduced with fluorescent‐tagged Fe65, Arf6, Rac1, Cdc42 or RhoA. Membrane PI(4,5)P2 was used to mark membrane ruffling using fluorescent‐tagged PLCδ‐PH. Live neuronal cells or neurons were incubated with anti‐APP antibodies on ice to crosslink cell surface APP. Cells were incubated at 37°C and imaged at specific time points using confocal microscopy and live cell imaging. Result Crosslinking APP resulted in rapid recruitment of Fe65 and Arf6 to APP and membrane ruffles within 30 sec, which rapidly decreased by 2 min. The Rho‐GTPases Rac1, Cdc42 and RhoA demonstrated sustained colocalization with APP and ruffles from 30 sec through to 2 min. This decreased at 5 and 10 min as APP was internalized. The inhibition of Arf6 using NAV2729 prevented the recruitment of itself, Rac1, Cdc42, and RhoA at 30 sec. However, inhibition of Rac1 by EHT 1864 had no significant effect on the recruitment of Rac1 to crosslinked APP. Conclusion These results demonstrate the sequential recruitment of regulatory proteins which regulate macropinocytosis of APP in response to its crosslinking. Fe65 and Arf6 are rapidly recruited to APP, followed by sustained recruitment of Rac1, RhoA and Cdc42. These regulatory proteins could be targeted to modulate APP‐lysosomal trafficking and reduce Aβ production.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».