Site-Directed Mutagenesis of Position 204 Threonine to Isoleucine Failed to Generate Acid-Tolerant EGFP
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
Protonation of green fluorescent protein (GFP) in acidic conditions prevents the emission of fluorescent light and limits the ability to visualize, localize, and study acidic organelles. Therefore, it is critical to introduce mutations into enhanced GFP (EGFP) to generate acid-tolerant fluorescent proteins. This experiment aimed to replicate a threonine to isoleucine mutation at position 204 in EGFP and identify if acid-stable fluorescent proteins would be produced in the BL21(DE3) Escherichia coli system. Site-directed mutagenesis was utilized to generate T204I mutant EGFP. SDS-PAGE and fluorescence microscopy were employed to analyze induction success and fluorescence. Spectrofluorophotometry was used to determine the excitation and emission spectra of T204I mutant EGFP and whether acid-tolerant proteins were generated. Results illustrated that the mutation of threonine to isoleucine at position 204 produced fluorescent proteins at pH 7. However, at pH 6 and 5, proteins failed to fluoresce. The replication of the T204I mutation failed to generate acid-stable EGFP proteins in the BL21(DE3) E. coli system. There is significance in generating acid-stable cellular markers, as currently, no cellular markers thrive in acidic conditions. This limits the ability to study acidic organelles and acidic cellular processes. Creating acid-tolerant markers will permit a greater range of biological research.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle