Development of a protease-resistant ADAMTS13 to improve stability against proteolytic degradation
Notice bibliographique
Résumé
ABSTRACT: Recombinant ADAMTS13 (a disintegrin and metalloproteinase with a thrombospondin type 1 motif, member 13) was recently approved by the US Food and Drug Administration for the treatment of heritable thrombotic thrombocytopenic purpura, and preclinical studies have demonstrated its efficacy in treating other thrombotic conditions. However, the current ADAMTS13 product is susceptible to degradation by proteases, which may reduce its therapeutic efficacy. Protease-sensitive sites were mapped to the linker regions in ADAMTS13. The linkers were mutated to generate T4L/T8L-ADAMTS13, and an additional elastase cleavage site was also disrupted (T4L/T8L-ADAMTS13[I380G]). Degradation of each ADAMTS13 mutant was tested using purified coagulation or neutrophil proteases, activated neutrophils, or with plasma-based assays. FRETS-VWF73 and microfluidic flow assays were used to characterize their activity. Thrombin, factor Xa, factor XIa, kallikrein, and plasmin cleaved wild-type (WT)-ADAMTS13 at 2 sites. Mutation of both the T4- and T8-linkers protects against degradation at these sites over 3 hours. T4L/T8L-ADAMTS13(I380G) was resistant to elastase degradation. T4L/T8L-ADAMTS13 is stable in plasma thrombin generation assays and fibrinolysis assays, and T4L/T8L-ADAMTS13(I380G) exhibits improved stability to activated neutrophils. T4L/T8L-ADAMTS13 exhibited similar activity to WT-ADAMTS13 using FRETS-VWF73 and in a microfluidic VWF-platelet string cleavage assay. This work identifies prominent protease cleavage sites within ADAMTS13 and demonstrates that disruption of these sites does not impair its capacity to regulate VWF. Future work will explore the therapeutic efficacy of protease-resistant ADAMTS13 in vivo.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».