Amplex Red cellular uptake produces radical intermediates by myeloperoxidase and mediates oxidative stress
Notice bibliographique
Résumé
Amplex Red (AR) is commonly used to detect extracellular hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) and is considered a cell-impermeable compound. However, it would appear capable of entering cells based on its phenoxazine substructure and the report of its mitochondrial membrane permeability. Additionally, myeloperoxidase (MPO) oxidation of AR produces a fluorescent compound, resorufin, which has been reported, though the mechanism is not well-studied. EPR spin trapping using glutathione (GSH) revealed that AR metabolism produced AR radicals and glutathionyl radicals (GS • ). An intermediate metabolite, 3,7-dihydroxyphenoxazine, was observed by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), which supported AR radical disproportionation first and subsequently N-oxidation. Besides, in the presence of GSH, the formation of resorufin decreased significantly evidencing the reactivity of radical intermediates. Three types of AR-GS adduct were found using LC-MS and the resorufin GS-adduct was the dominant one. Regarding intracellular findings in HL-60 cells (that highly express MPO), LC-MS and fluorescence analysis showed AR penetrated the cell membrane and was oxidized by cellular MPO. Interestingly, we demonstrated that the oxidation of AR in HL-60 cells showed a significant time dependence; PF-1355, an MPO inhibitor, inhibited the oxidation of AR by MPO. Cell viability (ATP) revealed that 200 μM AR significantly decreased viability in HL-60 cells in 6 h. We also found that AR-mediated decreased total GSH and increased protein-radical formation. These findings revealed that AR is cell-permeable, and AR radicals induce cellular oxidative distress and lead to the formation of protein radicals, which correlate with the MPO-mediated mechanism of cytotoxicity. • Amplex Red radical metabolites can conjugate with GSH. • Amplex Red radical metabolites increase the production of glutathionyl radicals. • Amplex Red is a cell-permeable compound. • Amplex Red can be used to determine H 2 O 2 levels in peroxidase-containing cells. • Amplex Red myeloperoxidase metabolism induces the formation of protein radicals.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
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Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».