A single vesicle fluorescence microscopy platform to quantify phospholipid scrambling
Notice bibliographique
Résumé
Scramblases are physiologically important proteins that translocate phospholipids bidirectionally across cell membranes. For example, scrambling facilitated by dimers of the voltage-dependent anion channel 1 (VDAC1) enables endoplasmic reticulum-derived phospholipids to cross the outer membrane to enter mitochondria. Here we describe a protocol to obtain lipid translocation rates at a single-protein level, allowing for mechanistic understanding of scramblases. We reconstituted vesicles with fluorescent phospholipids and VDAC1 dimers and use high-throughput imaging to quantify their size and dimer content. We measure scrambling in each vesicle using a new assay and find that individual human VDAC1 dimers scramble lipids at rates ranging from under 100 to over 10,000 per second. This kinetic heterogeneity, masked in ensemble measurements, revealed that rapid scrambling is facilitated by specific VDAC1 dimers. Extending our analyses to bovine opsin, a monomeric G-protein-coupled receptor scramblase, we demonstrate the versatility of our platform for quantifying lipid scrambling and exploring its regulation.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,002 |
| Intégrité de la recherche | 0,003 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».