Direct Identification and Quantification of Recombinant Adeno-Associated Virus in Crude Cell Lysate and Conditioned Medium by Mass Photometry
Notice bibliographique
Résumé
Recombinant adeno-associated virus (rAAV) has attracted attention as a gene therapy vector. Monitoring the percentage of full particles (FPs) to the sum of empty particles (EPs) and FPs (F/E ratio) is required to optimize the rAAV production conditions; however, there is a lack of analytical methods to identify FPs and EPs and quantify the F/E ratio of rAAV without purification. Here, we established a direct analysis method for identifying FPs and EPs and quantifying the F/E ratio and genomic titer of unpurified rAAV in crude cell lysate and conditioned medium by mass photometry (MP). MP can detect the events of both molecules that bind to the glass surface and molecules that unbind from the glass surface. Few unbinding molecules were detected in the cell lysate and conditioned medium, but unbinding particles were as prevalent as binding particles in rAAV. By analyzing the unbinding side of the histogram, the F/E ratio of rAAV in the cell lysate was directly quantified with accuracy comparable to that of purified rAAV, which showed there was no interference from impurities. The genomic titer of rAAV in cell lysate was also estimated using particle counts of the unbinding side. This method can successfully determine the F/E ratio and estimate genomic titers of rAAV in crude cell lysate and conditioned medium during the manufacturing process. Direct quantification by MP is a convenient, rapid, and accurate method for quantifying unpurified rAAV and will be useful for improving rAAV production processes, for example, by screening manufacturing conditions.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».