Widefield-microscopy Based Detection of Calcium Oscillations in Precision Cut Lung Slices
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Rationale In the lung, changes in calcium oscillation frequencies drive airways smooth muscle contraction, making these oscillations relevant to airway hyperresponsiveness. These oscillations can be studies using fluorescent calcium probes. As cellular calcium levels change, calcium ions bind and unbind to the probe, resulting in brightness oscillations. Precision cut lung slices (PCLS) are increasingly relevant for studying airway disease, but their thickness presents challenges in the form of signals from out-of-focus cells, obscuring calcium oscillations. To date, this issue has only been overcome with confocal microscopy. A widefield imaging approach would lower the barrier to studying oscillations. Methods The ability to detect calcium oscillations using widefield microscopy was accomplished by staining live PCLS, then comparing the fluctuations in fluorescence emissions before and after a methacholine dose. Slices were stained with a solution of Calbryte-520 (5 uM), Pluronic™ F-127 (0.04%), in HBSS (includes 10mM HEPES, pH 7.3) at 37C and 5% CO2 for 1.5 hours. Stained slices were mounted to coverslip bottom 6 well plates using a transparent slice holder (physioMesh, SCIREQ, Canada) then imaged on a widefield automated epifluorescence microscope (physioLens, SCIREQ, Canada) equipped with a 20X 0.5NA Plan Fluorite objective (Evident Scientific, Japan). Airways were imaged before and after dosing with the following conditions: 6 frames per second for 30 seconds, with both brightfield and fluorescence imaging (ex/em: 480 nm/520 nm). The time course of intensity of each pixel is analyzed by Fast Fourier Transform (FFT) to obtain the oscillation frequency. Results We detect calcium oscillation in mouse PCLS using widefield imaging and Calbryte-520AM, as shown in Figure 1. At baseline, a region of interest is shown to be constant in brightness, in comparison to the dosed case which has eight percent increases in brightness occurring regularly. The baseline heat map shows either undetectable or slow oscillations in contrast to the dosed case, which shows multiple locations of increased oscillation frequencies at a value of 0.5hz, consistent with literature. Conclusion A widefield microscope, with the correct objective and a proper dye can be used to detect calcium oscillations in PCLS, something to date that has only done using confocal. Figure 1: Overview of calcium oscillations between baseline and dosed slices. Brightfield images of the airway, a heat map of oscillation frequency and the intensity trace of a region of interest (∼10 micron diameter) corresponding to the red arrow are shown for both the baseline and dosed cases. Scale 0.1mm.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».