Intracellular Phosphoflow Cytometry of Acute Myeloid Leukemia Patient-Derived Xenotransplants
Notice bibliographique
Résumé
To adapt and resist approved treatments, acute myeloid leukemia (AML) cells activate specific molecular pathways that lead to changes in gene expression, protein levels and activity. In this protocol, an approach is reported to explore targets phosphorylated downstream of oncogenic signaling in AML: p-STAT5 (Tyr694), p-4EBP1 (Thr37/46), p-RPS6 (Ser240/244), and p-ERK1/2 (Thr202/Tyr204). This method enables the assessment of how these pathways-major regulators of stemness maintenance, immune evasion, protein synthesis, and adaptation to oxidative and metabolic stress-are modulated by one or more tested compounds in bone marrow cells harvested from live mice by aspiration before and after the treatment phase. This minimally invasive method preserves cell integrity and reduces stress compared to bone-crushing techniques, which can induce damage and potentially affect experimental outcomes. To optimize intracellular antibody staining for flow cytometric analysis, a protocol was developed using paraformaldehyde fixation and methanol permeabilization. This approach ensures high staining precision and minimizes background noise, enabling reliable detection of intracellular signaling markers. One of the main advantages of this protocol is the development of a multiparametric antibody panel, allowing for simultaneous assessment of the four pathways within the same sample. Using a next-generation spectral flow cytometer with high sensitivity, dynamic shifts in pathway activation were observed depending on treatment conditions compared to pretreatment baseline levels in the same mice. This methodology enables precise in vivo analysis of signaling pathway modulation in patient-derived xenograft bone marrow samples without requiring euthanasia of the animals, providing valuable insight into the adaptive mechanisms of AML cells, and can guide the evaluation of therapeutic strategies aimed at targeting these pathways to overcome resistance.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».