An Aqueous‐Compatible On‐Column Approach for the Conjugation of Nucleic Acids Using Amino Modifiers
Notice bibliographique
Résumé
Nucleic acid conjugation has emerged as a powerful strategy for enhancing the chemical and biological versatility of synthetic oligonucleotides. Solid-support synthesis of oligonucleotides provides an avenue for nucleic acid conjugation, so long as the method is inherently compatible with the synthesis cycle. Many methods exist, post-synthetically (i.e., after strand extension via the DNA synthesizer), to add ligands to the strand while it is still bound to the solid support. These, however, tend to require stringent reaction conditions (i.e., anhydrous, degassed solvents, special apparatus), making them sometimes impractical for routine use. This article describes a streamlined aqueous-compatible on-column conjugation strategy for preparing nucleic acids containing site-specific chemical modifications. This method utilizes commercially available or easily synthesized monophosphate or carboxylate-containing ligands and solid-phase synthesized oligonucleotides containing amino-modified termini. Coupling is enabled by 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide (EDC) and N-methylimidazole (N-MeIm) chemistry in buffered aqueous-organic mixtures. The resulting conjugates are processed using typical deprotection and solid-support cleavage protocols, purified by standard techniques such as strong anion exchange high-performance liquid chromatography (SAX-HPLC), and are characterized by mass spectrometry (MS). © 2025 The Author(s). Current Protocols published by Wiley Periodicals LLC. Basic Protocol 1: Synthesis of zidovudine 5'-O-monophosphate Basic Protocol 2: On-column phosphoramidate-mediated conjugation of 5'-O-phosphorylated AZT to 5'-amino DNA Basic Protocol 3: On-column amide-mediated conjugation of Fmoc-protected glycine to 5'-amino modified DNA Basic Protocol 4: On-column amide-mediated conjugation of potassium benzoate to 5'-amino modified RNA.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,007 | 0,008 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».