An engineered redox‐switchable streptavidin mutein enables the high‐affinity capture and efficient elution of biotinylated ligands
Notice bibliographique
Résumé
Although the high affinity and specificity of the interaction between streptavidin and biotin are widely utilized to isolate biotinylated ligands, their elution over practical timescales requires the use of strongly denaturing conditions that are incompatible with many target biomolecules. To overcome this limitation, we previously engineered a disulfide bond into a critical loop of streptavidin to create the redox-sensitive M88 mutein, which releases biotinylated ligands ~19,000-fold faster in the reduced state when compared with the oxidized state. To optimize the speed and efficiency of ligand recovery, we describe how multiple mechanisms like disulfide bond reduction, increasing temperature, elevating pH, and adding organic cosolvents can dramatically increase the rates of dissociation for different types of biotinylated ligands bound to M88 or wild-type streptavidin coupled to magnetic beads. By combining these mechanisms, we demonstrate how a range of biotinylated biomolecules (peptide, oligonucleotide, and protein) can be efficiently recovered under mild conditions that preserve biological activity. M88 magnetic beads thus provide many advantages over currently available methods using either wild-type streptavidin or lower affinity biotin-binding proteins for applications requiring both high affinity capture and efficient release of target biomolecules under non-denaturing conditions.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».