Protocol for reconstituting enzymatic activities for ultra-large histone methyltransferases NSD1 and SETD2 using a baculovirus expression system
Notice bibliographique
Résumé
Expression and reconstitution of large proteins in the human proteome are challenging and often require the use of a mammalian cell expression system that is costly and inefficient. Here, we present a protocol to reconstitute catalytically active, full-length NSD1 (nuclear receptor binding SET domain protein 1) and SETD2 (SET domain containing 2, histone lysine methyltransferase) using a clonal baculovirus expression system. We describe steps for producing baculovirus, clonal selection, and protein reconstitution. We then detail procedures for using animatic assays. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Hsu et al. 1 • Instructions for clonal selection of baculovirus using the Sf9 expression system • Expression and purification of large methyltransferases NSD1 and SETD2 • Steps for a histone methyltransferase assay for catalytic activity of NSD1 and SETD2 Publisher’s note: Undertaking any experimental protocol requires adherence to local institutional guidelines for laboratory safety and ethics. Expression and reconstitution of large proteins in the human proteome are challenging and often require the use of a mammalian cell expression system that is costly and inefficient. Here, we present a protocol to reconstitute catalytically active, full-length NSD1 (nuclear receptor binding SET domain protein 1) and SETD2 (SET domain containing 2, histone lysine methyltransferase) using a clonal baculovirus expression system. We describe steps for producing baculovirus, clonal selection, and protein reconstitution. We then detail procedures for using animatic assays.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».