Enabling Fluorescence Lifetime Imaging Multiplexing Using UnaG through Its Modification with Canonical and Noncanonical Amino Acids
Notice bibliographique
Résumé
Fluorogen-activating proteins are powerful molecular tools for microscopy, including functional imaging. These proteins serve as an alternative to GFP-like proteins, as they do not require oxygen for chromophore maturation. However, the restricted selectivity of proteins to chromophores, combined with the limited number of spectral channels of conventional fluorescent microscopes, hinders the development of multicolor synthetic dyes. Additionally, the poor cell and tissue permeability of synthetic chromophores further limits their utility. In this work, we address these challenges by combining time-resolved methods with the rational design of the UnaG protein, which utilizes bilirubin as a natural chromophore. To turn UnaG into a palette of probes for fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM), we solved two practical problems: first, we determined the limits of bilirubin lifetime variations in response to changes in the protein structure and, second, we determined what minimal structural changes can be reliably distinguished by lifetime analysis in cellula . Combining classical point mutagenesis and the translational introduction of noncanonical amino acids, we generated UnaG with fluorescence lifetimes ranging from hundreds of picoseconds to nanoseconds. We explored the potential for further modification of the UnaG protein matrix to optimize spectral and temporal characteristics of bilirubin fluorescence and its quantitative detection through time-resolved approaches.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».