Discovery and Characterization of Cell-Permeable Inhibitors of <i>Leishmania mexicana</i> CLK1 Using an In-Cell Target Engagement Assay
Notice bibliographique
Résumé
Leishmaniasis is a neglected tropical disease with limited treatment options and significant unmet medical need. Here, we report the development of a bioluminescence resonance energy transfer (BRET)-based target engagement assay in live cells to identify and validate cell-permeable, ATP-competitive inhibitors of Leishmania mexicana (Lmx)CLK1. LmxCLK2, a closely related paralog with an identical protein kinase domain, is also considered in our analysis. Genetic and pharmacological evidence indicates that simultaneous deletion or inhibition of both LmxCLK1/2 is lethal to the parasite. Using our newly developed assay, we screened a library of human kinase inhibitors and identified WZ8040, a third-generation EGFR inhibitor, as a potent LmxCLK1 ligand. WZ8040 demonstrated robust target engagement in both promastigotes and macrophage-internalized amastigotes, with an EC 50 value of 2.1 μM for amastigote killing and minimal toxicity to host macrophages. Biochemical assays confirmed that WZ8040 covalently binds and inhibits LmxCLK1, with mass spectrometry identifying Cys172 as the primary site of modification. Genetic validation using overexpression and knockout lines supports LmxCLK1 as the primary target of WZ8040. However, the retained activity of WZ8040 in mutant lines with the Cys172Ala substitution suggests that covalent binding is not essential for compound efficacy. Our findings highlight the utility of BRET-based assays for target validation in kinetoplastid parasites and underscore the potential of CLK1/2 as druggable kinases in Leishmania . This integrated approach provides a framework for accelerating the discovery of novel antileishmanial agents through target engagement-guided strategies.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».