Integration of Primary Murine Osteocytes for In Vitro Mechanobiology Studies
Notice bibliographique
Résumé
This article describes the isolation, culture, and integration of primary murine osteocytes on a microfluidic platform for in vitro mechanobiology studies. Osteocytes are mechanosensitive cells embedded within the bone matrix and regulate bone remodeling. The MLO-Y4 osteocyte-like cell line typically used for mechanobiology studies can provide a good physiological response to mechanical stimulation but has been shown to have missing or low levels of key osteocyte markers found in vivo, such as sclerostin. However, primary osteocytes are difficult to isolate and study in vitro due to their location within the bone matrix, and the scope of existing protocols for osteocyte extraction only includes the isolation of primary cells using collagenase. Here, optimized protocols for the isolation, culture, and real-time calcium imaging of primary osteocytes in response to oscillatory fluid flow are outlined. Moreover, we discuss how to incorporate and maintain primary osteocytes on a physiologically relevant microfluidic platform for in vitro bone metastasis studies. In calcium imaging and microfluidic experiments, primary osteocytes are compared to the MLO-Y4 cell line as a control or reference group. Primary osteocytes can be extracted in 6 to 8 hr and typically require 1 week to recover before use in experiments. Calcium imaging of primary osteocytes can be completed in 24 hr. The time required for microfluidic culture varies on the platform used; the microfluidic experiment described here takes 6 days to complete. We anticipate that the information from this protocol will aid other researchers with incorporating primary osteocytes to enhance the biological relevance of in vitro studies on bone mechanobiology and disease. © 2025 The Author(s). Current Protocols published by Wiley Periodicals LLC. Basic Protocol 1: Isolation of primary murine osteocytes using Liberase TM Basic Protocol 2: Primary osteocyte subculture and E11/podoplanin staining Basic Protocol 3: Real-time calcium imaging of primary osteocytes Basic Protocol 4: Integration of primary murine osteocytes onto a microfluidic platform for observing bone metastasis.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».