Enhanced virus reconstitution of human herpesvirus 6A (HHV-6A)
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Background Human herpesvirus 6A (HHV-6A) is a member of the betaherpesvirus family and is associated with neurotropic diseases. Despite its clinical significance, HHV-6A research has been hampered by challenges in the generation of recombinant viruses. Although bacterial artificial chromosome (BAC) systems and well-established mutagenesis techniques are available for HHV-6A, its tendency towards latency and slow viral replication pose inherent challenges to reconstituting infectious virus. Virus reconstitution has been achieved by only a few laboratories worldwide and remains a hurdle for HHV-6A research. Methods We addressed these key bottlenecks of HHV-6A reconstitution by systematically refining nucleofection and stimulation conditions. Using a reporter virus, we improved cell preparation, implemented a dimethyl sulfoxide (DMSO) treatment, removed contaminating DNA by exonuclease V digestion, optimized the cell recovery after nucleofection, and assessed novel stimulation strategies that accelerate virus replication. Results In this study, we established a cost-effective and robust method for HHV-6A reconstitution. Combining DMSO and Exonuclease V pretreatment with an optimized recovery after nucleofection resulted in an increased transfection efficiency of up to 30%. Selected stimuli promoted lytic replication and facilitated the recovery of infectious virus. Combining IOX2 + hydrocortisone exceeded all other stimuli, reducing the reconstitution time to two weeks. Our optimized protocol has proven to be highly reproducible across multiple laboratories, different mutant viruses, instruments, and operators, ensuring reliability and broad applicability. It also allowed us to generate a novel reporter virus that shed light on the replication kinetics of the virus. Discussion This efficient HHV-6A reconstitution protocol addresses long-standing challenges, offering a widely adoptable method that simplifies recombinant virus generation and enhances future research into viral gene functions and infection mechanisms.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».