Amplification, purification, and lyophilization of mycobacteriophages for therapeutic use
Notice bibliographique
Résumé
ABSTRACT Infections with nontuberculous mycobacterium (NTM) strains are frequently nonresponsive to antibiotic regimens, even after multiple drugs are used for extensive periods of months or years. Therapy with bacteriophages specific for NTM clinical isolates shows considerable promise in compassionate-use single-patient cases but, like antibiotics, must be administered over long periods of time and typically intravenously. It is thus important that the phage preparations are highly purified and stable to avoid adverse reactions or decay of viability. Here, we describe methods for purification of mycobacteriophages including CsCl equilibrium gradient ultracentrifugation, desalting by either dialysis or column chromatography, and stabilization for storage by lyophilization. These phage preparations have low levels of contaminating Mycobacterium smegmatis host proteins and host genomic DNA, and the lack of host DNA strongly indicates that these phages are not competent for generalized transduction. Desalting by column chromatography is both rapid and efficient for removal of CsCl after equilibrium density ultracentrifugation, and the preparations maintain viability well in lyophilization using trehalose as an excipient. Once lyophilized, the phage preparations typically maintain viability over extended periods of time, although once reconstituted at working dose concentrations and distributed into syringes, they experience about a 10-fold loss in viability over a 2-week period. IMPORTANCE Bacteriophages specific for Mycobacterium hosts show promise as potential therapeutic agents for controlling nontuberculosis Mycobacterium infections. Phage administration for compassionate-use cases frequently involves intravenous twice-daily doses, but over a period of many months or years; the biosafety profile is, therefore, of substantial importance. Here, we describe the detailed methods we have used to grow mycobacteriophages to high titers, to concentrate and purify them so that they are devoid of major contaminants, and methods for stable long-term storage.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».