A size exclusion chromatography- and ultrafiltration-based two-step process for purifying phage for therapeutic applications
Notice bibliographique
Résumé
The rise in the number of antibiotic-resistant bacteria has created the need for alternative therapeutic approaches, including bacteriophage therapy. Bacteriophages are viruses that infect and lyse bacteria and therefore offer a highly targeted and adaptable solution to combat multidrug-resistant pathogens. However, the scalable purification of bacteriophages, while achieving high yield of product and efficient removal of impurities such as endotoxins, remains a significant barrier to their therapeutic adoption. This study presents a two-step purification process combining size-exclusion chromatography (SEC) and ultrafiltration as an efficient and scalable method for bacteriophage purification. T7 was used as the model bacteriophage. Preparative SEC using a cuboid device served as the first step for removing endotoxin and other impurities from bacterial culture filtrate. The SEC-purified phage sample was then processed using a carrier phase ultrafiltration and backflow recovery technique to further purify and enrich the bacteriophage. Phage titer, endotoxin level, and protein concentration were quantified at each stage to evaluate purification performance. The endotoxin level was substantially reduced, decreasing from 1.44 EU/mL in the initial culture filtrate to 0.49 EU/mL in the final purified phage sample, the FDA's acceptable limit for products that directly or indirectly contact the cardiovascular and lymphatic systems being 0.50 EU/mL. The phage titer was enhanced from 5.33×10⁹ PFU/mL (in the cell culture filtrate) to 9.33×10⁹ PFU/mL in the final product. The overall protein removal achieved was 95.8 % while the overall endotoxin removal was 92.5 %. These findings suggest that the proposed two-step purification process could be developed further and adopted for scalable production of high-purity bacteriophage preparations suitable for therapeutic applications.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».