Production and Characterization of Pre-Fusion Ebola Virus GP2 Expressed in Drosophila S2 Cells for Analysis of Vaccine-Induced Immune Responses 3190
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Description Introduction The Ebola virus (EBOV) glycoprotein (GP) contains two subunits (GP1 and GP2). Upon receptor binding of proteolytically cleaved GP1 in the endosome, pre-fusion GP2 undergoes conformational changes, facilitating membrane fusion to release viral RNA. Our lab has developed a recombinant EBOV GP subunit vaccine with highly protective efficacy in non-human primates (NHPs). However, the mechanism by which GP-specific antibodies confer protection requires further investigation. Our research focuses on investigating the role of GP2-specific antibody binding in vaccine-induced protection. Method: The EBOV GP2 MUT gene was designed incorporating pre-fusion conformation stabilizing mutations and containing a C-tag for purification. Expression plasmids were transfected into Drosophila S2 cells and stably transformed cell lines selected by adding hygromycin. Protein expression was induced by adding CuSO4 and purified using affinity chromatography before characterization by SDS-PAGE and Western blot. Antibody response to GP2 MUT from immunized NHP sera was analyzed using multiplex immunoassay. Results The EBOV GP2 gene was successfully cloned into the pUHM vector, and sequencing confirmed the presence of the targeted mutations and C-tag. GP2 was successfully purified using affinity chromatography and characterized by SDS-PAGE and Western Blot. Stable pre-fusion GP2 was able to detect IgG from immunized NHPs. Funding Sources This project was supported by grants from the Undergraduate Research Opportunities Program, the National Institute of Allergy and Infectious Diseases (R01AI132323), and the National Institute of General Medical Sciences IDeA Networks of Biomedical Research Excellence P20GM103466. The content is solely the responsibility of the authors and does not represent the official views of the NIH. Topic Categories Vaccines and Immunotherapy (VAC)
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».