A BRET biosensor for measuring uncompetitive engagement of PRMT5 complexes in cells
Notice bibliographique
Résumé
Protein arginine methyl transferase 5 (PRMT5) plays a global role in cell physiology and is an established therapeutic target in cancer. In approximately 10-15% of human cancers, deletion of the methylthioadenosine phosphorylase (MTAP) gene results in accumulation of methylthioadenosine (MTA), exposing a synthetic lethality and opportunity for precision medicine by selective targeting of PRMT5 in this context. Reported small molecule PRMT5 inhibitors engage either cosubstrate S-adenosyl methionine (SAM) or peptide-substrate pockets through diverse mechanisms. A subset of chemotypes demonstrate uncompetitive engagement with SAM or its inhibitory metabolic precursor, MTA. Although uncompetitive engagement can be evaluated in cell-free systems, no methods exist to directly assess this in cells. Here, we describe the development of a fluorescent probe that acts as a dynamic BRET biosensor of the intracellular SAM/MTA pool that overcomes the current limitations of competitive binding analyses. Using this biosensor, we evaluate a range of diverse PRMT5 inhibitors to mechanistically characterize and quantify uncompetitive target engagement as well as ternary complex formation at PRMT5-SAM and PRMT5-MTA complexes in live cells, enabling direct insights into drug mechanism-of-action and metabolite-dependent responses of inhibitors.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,003 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,003 | 0,003 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».