DNA methylation, but not microRNA expression, is affected by in vitro THC exposure in bovine granulosa cells
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Background A global increase in cannabis use has led to questions about its effects on fertility. The rise in consumption amongst women of reproductive age is a growing concern, as this group is vulnerable in terms of reproductive health. Ample evidence suggests that the psychoactive component of cannabis, Δ9-Tetrahydrocannabinol (THC), interacts with the endocannabinoid system (ECS), that helps regulate mammalian reproduction. This study aimed to research the epigenetic effects of THC in bovine granulosa cells (GCs) by (1) investigating global DNA methylation via measuring 5-mC and 5-hmC levels; (2) measuring key methylation regulators, including the methylating enzymes DNMT1, DNMT3a, DNMT3b and the demethylases TDG and TET1/2/3; and (3) assessing fertility-associated miRNAs key in developmental competency, including miR-21, -155, -33b, -324 and -346. Methods Bovine GCs were used as a translational model for reproductive toxicity in humans. To determine THC effects, GCs were isolated from Cumulus-Oocyte-Complexes (COCs) from bovine ovaries, cultured in vitro for 7 days, or until confluent, and cryopreserved at passage 1 (P1). For experimentation, cells were thawed, cultured until passage 2 (P2), serum restricted for 24-h and treated for 24-h in one of five groups: control, vehicle (1:1:18 ethanol: tween: saline) and three clinically relevant THC doses (0.032, 0.32 and 3.2 μM). Global methylation was assessed by measuring 5-mC and 5-hmC levels with flow cytometry. To assess mRNA and protein expression of methylation regulators and miRNA profiles, qPCR and Western Blotting were utilized. Shapiro-Wilk test was used to determine normality within datasets. One-way ANOVA was applied to determine statistical significance using GraphPad Prism 6.0.0. Results Results indicate a significant decrease (p = 0.0435) in 5-mC levels following low THC exposure, while no changes were observed in 5-hmC levels. A significant increase in DNMT1 following high THC exposure at the RNA level (p < 0.05) and a significant increase following low THC exposure at the protein level (p = 0.0048) were also observed. No significant differences were observed in DNMT3a/3b, TDG, TET1/2/3 mRNAs or in any of the miRNAs analyzed. Conclusions This research suggests that THC mainly affects DNA methylation, but not miRNA profiles, ultimately altering gene expression and likely impairing oocyte competence, maturation, and fertilization potential.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».