Purification of a subset of Saccharomyces cerevisiae peroxisomal proteins
Notice bibliographique
Résumé
Peroxisomes are ubiquitous and are considered to be vital organelles in eukaryotic cells; however, unlike mitochondria and chloroplast, they lack DNA and a protein secretory apparatus. Therefore, peroxisome biogenesis requires a group of proteins called peroxins encoded by the pex genes. Out of the thirty two known peroxins discovered so far, a subset of peroxins including enzyme IDP3 and proteins namely, PEX18, PEX21 and PEX6 were chosen for this research. IDP3 plays a vital role in peroxisomal metabolism where it generates NADPH which in turn is needed by the peroxisomal enzymes to degrade unsaturated fatty acids. PEX18 and PEX21 are mutually redundant but essential for the transport of PTS2 targeted proteins into the peroxisome. PEX6 is involved in the ATP-dependent recycling of the protein receptor from the peroxisomal membrane to the cytosol. Expression plasmids were constructed that encoded each of these proteins in tandem with a histidine tag at either or both the amino and carboxy terminals of the protein. The purification of IDP3 was achieved using affinity chromatography on a nickel resin. After several unsuccessful attempts using ion exchange and size exclusion chromatography, PEX18 and PEX21 were purified by nickel affinity chromatography after denaturation to expose their His tags. The expression of PEX6 was poor by comparison with the other proteins and the low amount of protein precluded a complete purification. Future work will involve crystal screen trials, X-ray diffraction and structure refinement.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».