O antigen Biosynthesis in Gram-Negative Bacteria: Characterization of Glycosyltransferases WclX and WclW from Escherichia coli O117 and WfbG from Salmonella enterica O43
Notice bibliographique
Résumé
The outer membrane of Gram-negative bacteria is coated with complex polysaccharides, constituting primarily of lipopolysaccharide (LPS). LPS is an important virulence factor of Gram-negative bacteria essential to their survival and pathogenicity. The O antigen being the outermost component of LPS, plays crucial roles in immune evasion, adhesion, colonization, and biofilm formation. Understanding the enzymes and mechanisms involved in O antigen biosynthesis can lead to new antibacterial strategies to combat bacterial infections. Escherichia coli serotype O117 (ECO117) are pathogenic bacteria that produce Shiga toxin. The O antigen repeating unit of ECO117 has the structure [4-D-GalNAcβ1-3-L-Rhaα1-4-D-Glcα1-4-D-Galβ1-3-D-GalNAcα1-], similar to the ECO107 repeating unit that contains N-acetylglucosamine instead of glucose. Salmonella enterica serotype O43 (SO43) has the O antigen repeating unit structure [4-L-Fucα1-2-(D-Galα1-3)-D-Galβ1-3-D-GalNAcα1-3-D-GlcNAcβ1-], which contains a mimic of the human blood group B and E. coli O86 (ECO86) antigens. Compounds Galβ1-3-GalNAc-PO3-PO3-(CH2)11-O-phenyl, GlcNAc-PO3-PO3-(CH2)11-O-phenyl, and GalNAc-PO3-PO3-(CH2)11-O-phenyl were chemically synthesized as acceptor substrate analogs of the natural undecaprenyl phosphate intermediate in bacteria. Previously, WclY from ECO117 was shown to transfer glucose to Galβ1-3-GalNAc-PO3-PO3-(CH2)11-O-phenyl and that Arg194Cys mutants converted WclY to a highly active GlcNAc-transferase. We expressed the glycosyltransferases WclX and WclW in the pathway, demonstrating they complete the synthesis of the ECO117 and O107 repeating units. WclX strictly transfers L-rhamnose (L-Rha) from TDP-L-Rha with high specificity for the WclY enzyme product as the acceptor. Mutational analysis revealed several conserved Asp residues within WclX are essential for the catalytic of transfer of L-Rha. WclW strictly transfers N-acetylgalactosamine from UDP-GalNAc to a broad range of acceptors that contain L-Rha at the non-reducing end. Using L-Rhaα-p-nitrophenyl as an acceptor for WclW, nuclear magnetic resonance of the product revealed WclW is a β1-3-GalNAc-transferase. Additionally, we recombinantly expressed WfbG from SO43 and WbnH from ECO86 demonstrating both enzymes are specific for UDP-GalNAc as a donor. However, WfbG could use either GlcNAc-PO3-PO3-(CH2)11-O-phenyl or GalNAc-PO3-PO3-(CH2)11-O-phenyl as an acceptor, whereas WbnH was only active with GalNAc-PO3-PO3-(CH2)11-O-phenyl. Bioinformatics indicated the presence of a GlcNAc-diphosphate-undecaprenyl 4-epimerase gene that may explain the structural difference between the two repeating units. These studies set the foundation for discovery of antibacterial agents and preparation of O-antigenic oligosaccharides for glycoconjugate vaccines.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».