Molecular and biochemical characterization of ExeAB, two components involved in the type II secretion pathway of <i>Aeromonas hydrophila</i>.
Notice bibliographique
Résumé
The objective of this study was to investigate the role of ExeA in the Aeromonas hydrophila type II secretion pathway.Pulse-chase analysis indicated that ExeA was stabilized by coexpression with ExeB.From in vivo cross-linking analyses, both proteins were found to participate in a complex of approximately 85 kDa, each requiring the presence of the other protein.Radiolabeling followed by cross-linking, immunoprecipitation and then reduction of the cross-links confirmed the presence of the two proteins in the same complex.The complex could also be extracted intact from cell membranes with non-ionic detergents.In addition, gel filtration analysis performed with octyl-glucoside soluble membrane extracts suggested the existence of a native heterododecameric ExeAB complex.Examination of a collection of ExeA substitution derivatives, altered in consensus ATP binding/hydrolysis motifs located near its N-terminus, suggested that ATP binding by ExeA is required for ExeAB complex formation, while hydrolysis is required for its function in secretion.To directly examine ExeA function, the N-terminal cytoplasmic domain of ExeA with the addition of a C-terminal hexahistidine tag (cytExeA) was overproduced in Escherichia coli and purified by metal chelate affinity chromatography followed by anion-exchange chromatography.Purified preparations of cytExeA were found to exhibit ATPase activity dependent on the presence of a divalent cation.Enzymatic characterization of cytExeA revealed an optimum reaction temperature of approximately 37-40 °C and a pH of 7-8.As well, Mg2+ was the preferred cation;cytExeA exhibited an apparent Km for Mg-ATP of 1.2 mM and a V.), of 1.1 nmoles mind mg-I of protein.cytExeA was also able to utilize CTP, GTP and UTP as substrates.As well, inhibitors of F-type ATPases were found to significantly reduce cytExeA
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».