Improving adeno-associated virus serotype 6 production and transduction for gene delivery and CAR T-cell therapy
Notice bibliographique
Résumé
Chimeric antigen receptor (CAR)-T cell therapy is a promising immunotherapy that involves engineering T cells by adding a CAR to their surface to specifically target and "destroy" tumour cells.Adeno-associated viruses (AAVs) are well-suited for this application as they can deliver a DNA template for the knock-in of a transgene via homologous recombination with high efficiency.With the growing interest in immunotherapy, there is an increasing demand for AAV serotype 6 (AAV6), the serotype with the highest tropism for immune cells.However, the current limitations in AAV6 production and transduction pose significant challenges to effectively using this serotype in therapy.In this thesis, I aimed to improve the production and transduction capacity of AAV6 and to use this vector for site-specific integration of CAR into T cells.One of the significant limitations in AAV manufacturing is low-cell-density production.This is due to the Cell Density Effect, which limits the potential of suspension cell-based platforms to increase yields.We investigated the improvement of AAV6 production by transient transfection of suspension-adapted HEK293SF cells.We found that by providing plasmid DNA on a cell basis and at a medium cell density of 4 million cells per mL, we achieved titers above 10 10 viral genomes (VG)/mL, a significant increase compared to established methods.This medium-cell-density production method, validated in a 3-L bioreactor scale, lays the foundation for large-scale process operations, potentially solving the current vector shortage in AAV manufacturing.Another significant challenge in AAV transduction is the large number of AAV6 required for effective transduction, estimated at 10 6 viral genomes per cell.We evaluated the use of cellpenetrating peptides to enhance the transduction of AAV6 into T cells.We found that the peptides TAT-HA2 and LAH4 significantly improved the transduction efficiency, with LAH4 resulting in a 10-fold increase at the lowest multiplicity of infection tested.This approach could be further developed to improve the transduction of AAVs into other cell types.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,004 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».