Molecular analysis of lipid synthesis and its role in vesicle trafficking, de novo cloning, expression, and characterization of two human cholinephosphotransferases
Notice bibliographique
Résumé
Phosphatidylcholine (PC) and phosphatidyletlianolamine (PE) are the most abundant phospholipids in eukaryotic cells, comprising 50% and 25% of membrane phospholipid mass, respectively. Cholinephosphotransferase catalyzes the final step in the de novo biosynthesis of PC through the Kennedy pathway via the transfer of phosphocholine from CDP-choline to diacylglycerol, with the release of CMP. Ethanolaminephosphotransferaser catalyzes an analogous reaction with CDP-ethanolamine as the phosphobase donor for the de novo biosynthesis of PE. Together, these two enzyme activities determine both the site of synthesis and the fatty acyl composition of PC and PE synthesized de novo. Attempts to purify these enzymes have been largely unsuccessful due to their integral membrane bound nature, and thus, most of the studies to date have used microsomal membrane preparations to characterize these enzymes. The recent cloning of the Sacccharomyces cerevisiae choline- and ethanolaminephosphotransferases (CPT1 and EPT1) has facilitated the search for mammalian cDNAs encoding these enzyme activities. This work reports the cloning expression, and characterization of the first mammalian choline- and ethanolaminephosphotransferase cDNAs. Human choline/ethanolaminephosphotransferase 1 (hCEPT1) codes for a 416 amino acid protein that can catalyze the de novo biosynthesis of both PC and PE in vitro and in vivo. Human cholinephosphotransferase 1 (hCPT1) encodes a 406 amino acid protein specific for the enzymatic synthesis of PC in vitro and in vivo. In vitro assessment of hCEPT1 and hCPT1-derived cholinephosphotransferase activity revealed differences in diradylglycerol specificities including their capacity to synthesize platelet-activating factor and platelet-activating factor precursor. While hCEPT1 mRNA was found in similar abundance in all tissues tested, expression of hCPT1 mRNA varied greater than 100-fold between tissues, and was most abundant in testis, followed by colon, small intestine, heart, prostate, and spleen. Immunofluorescence studies revealed that hCEPT1p was localized to the ER and the nuclear membrane, while hCPT1p was localized to the Golgi apparatus. Site-directed mutagenesis of hCEPT1 demonstrated that glycine156 plays a role in CDP-ethanolamine binding, while threonine214, valine 216, and isoleucine221 appear to play a role in determining the specificity of DAG utilized by hCEPT1p. Mutation of glutamate215 suggested that it might play a role in both DAG and CDP-aminoalcohol binding, although the exact roles remain to be elucidated.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
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Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».