Characterisation of novel culturing systems for the in vitro expansion of haematopoietic stem cells
Notice bibliographique
Résumé
Haematopoietic stem cell (HSC) self-renewal is essential for the development and homeostasis of the blood system.Self-renewal expansion divisions where one HSC makes two equally potent daughter HSCs can be harnessed to create large numbers of HSCs for cell and gene therapies.Although mouse and human HSCs can be expanded in vitro to unprecedented levels using recently developed expansion cultures, not all cells in culture maintain stem cell properties.Chapter 4 of this thesis focused on refining the identification of functional expanded HSCs by using ESAM as a novel marker and replacing the need for the Fgd5 ZsGreen•ZsGreen/+ reporter, which in turn averts the need to cross genetically modified mice onto the Fgd5 background in order to permit HSC identification.Successive chapters (5 and 6) focused on the newly described expansion system for human HSCs -focusing initially on establishing this system for cord blood samples and testing further refinements to this expansion protocol via the supplementation of additional molecules to the culture media to increase HSC frequency.Chapter 5 of this thesis successfully applied this culture system to expansion of previously difficult to culture peripheral blood samples from healthy individuals and patients with early-stage blood cancers.This thesis then aimed to unpick the specific roles of cytokine agonists used in the human HSC culture media, specifically the thrombopoietin-mimetic butyzamide -a strong candidate for culture refinement which could alter downstream signalling and therefore culture success.To elucidate the effects of butyzamide versus alterative thrombopoietin (TPO) mimetics, in Chapter 6, receptor internalisation assays, fluorescent cell barcoding with phospho-flow cytometry, and phosphoprotomics were used on cell lines expressing either wild-type TPOreceptor (MPL), or JAK2 V617F mutated MPL, and have identified key differences which may be exploitable for further improving and modulating cultures for therapeutic purposes
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».