A glycoform of the purple acid phosphatase AtPAP26 interacts with a GNA-apple domain lectin (AtGAL1) in cell walls of phosphate-starved Arabidopsis thaliana
Notice bibliographique
Résumé
Purple acid phosphatases (PAPs) function in the acquisition and recycling of inorganic phosphate (Pi), a crucial but environmentally-limiting macronutrient for plant growth. Among 29 predicted PAPs of the model plant Arabidopsis thaliana, AtPAP26 (At5g34850) functions as the principal intra- and extracellular PAP isozyme that scavenges Pi during Pi-deprivation or leaf senescence. A pair of secreted, 55 kDa AtPAP26 ‘glycoforms’ (AtPAP26-S1 and AtPAP26-S2) were resolved during lectin-affinity chromatography of cell wall extracts from Pi-deprived Arabidopsis suspension cells and purified. High resolution liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) demonstrated that their glycans were comparable at Asn103, whereas Asn365 and Asn422 glycosylation sites were extensively modified in AtPAP26-S2 by the addition of up to seven terminal mannose residues (to N-acetylglucosamine) to form high mannose glycans. A 55 kDa protein that co-purified with AtPAP26-S2 was identified by LC-MS/MS as Arabidopsis GNA and apple domain-containing lectin-1 (AtGAL1). AtGAL1 (At1g78850) belongs to Arabidopsis’ Galanthus nivalis agglutinin (GNA) lectin family, whose GNA domain binds high mannose N-glycans. AtGAL1 cross-reactivity with anti-AtGAL1-IgG was markedly attenuated when the lectin was incubated in the presence of a thiol-reducing reagent (consistent with three predicted disulfide bonds in AtGAL1’s apple domain). Reciprocal far western immunodot blotting demonstrated a specific interaction between purified AtGAL1 and AtPAP26-S2, but not AtPAP26-S1. Analytical gel filtration FPLC indicated that AtGAL1 and AtPAP26-S2 associate to form a 112 kDa heterodimer. Bimolecular fluorescence complementation assays established that like AtPAP26, AtGAL1 is also targeted to lytic vacuoles of Pi-starved Arabidopsis cells, and that both proteins interact in vivo. AtGAL1 pre-incubation significantly enhanced the acid phosphatase activity and thermal stability of AtPAP26-S2, but not AtPAP26-S1. Interestingly, LC-MS/MS also revealed that purified AtGAL1 was bisphosphorylated at Tyr38 and Thr39. Secreted AtGAL1 polypeptides were upregulated to a far greater extent than AtGAL1 transcripts during Pi deprivation, indicating post-transcriptional control of AtGAL1 expression. I hypothesize that AtGAL1 plays a key role during Pi deprivation through its interaction with high mannose glycans of AtPAP26-S2, and consequent positive impact on AtPAP26-S2 phosphatase activity and stability. The current study appears to provide the first definitive evidence for involvement of glycoforms, lectins, or a phosphotyrosylated protein in plant Pi starvation responses.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».