Harnessing Contact-Quenched, Profluorescent Chemical Probes for Sensitive Determination and High-Throughput Measurements of Enzyme Activity
Notice bibliographique
Résumé
High Resolution Image Download MS PowerPoint Slide Dual-labeled, profluorescent chemical probes have been developed to quantify and visualize a specific enzyme’s activity in complex biological media. The intact chemical probes often exhibit minimal fluorescence due to fluorescence quenching, but their intrinsic fluorescence can be released by a favorable enzyme-catalyzed reaction. Contact quenching represents one of several fluorescence quenching mechanisms. However, it is seldom intentionally implemented in the synthesis of dual-labeled, profluorescent chemical probes, because the structure of a contact quenching construct requires the formation of a ground-state fluorophore-quencher/-fluorophore complex. The ability of such dual-labeled molecular probes to act as intramolecular dimers cannot be predicted. We previously revealed that a mono exo -bicyclo[6.1.0]nonyne ( exo -BCN)-derivatized cystamine framework was critical to synthesizing sensitive, dual-labeled, profluorescent chemical probes capable of contact quenching. Here, we exploited the nonsymmetrical mono - exo -BCN-cystamine backbone by sequentially coupling it with two different carboxyfluorescein (FAM) derivatives and subsequently synthesizing four nonsymmetrical bis -FAM chemical probes. The fluorescence turn-on properties of the bis -FAM chemical probe with the lowest background FAM fluorescence were characterized by kinetic studies. Moreover, the release of two FAM equivalents from the fluorescence turn-on chemical probe during reactions was utilized to develop sensitive assays for measuring the activity and inhibition of two serum biomarkers, butyrylcholinesterase (BChE) and paraoxonase 1 (PON1) lactonase. We also developed an efficient, high-throughput assay for detecting BChE activity based on the chemical probe. Finally, the fluorescence assays successfully quantified the activities of BChE and PON1 lactonase in human serum.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».