Harnessing Contact-Quenched, Profluorescent Chemical Probes for Sensitive Determination and High-Throughput Measurements of Enzyme Activity
Notice bibliographique
Résumé
High Resolution Image Download MS PowerPoint Slide Dual-labeled, profluorescent chemical probes have been developed to quantify and visualize a specific enzyme’s activity in complex biological media. The intact chemical probes often exhibit minimal fluorescence due to fluorescence quenching, but their intrinsic fluorescence can be released by a favorable enzyme-catalyzed reaction. Contact quenching represents one of several fluorescence quenching mechanisms. However, it is seldom intentionally implemented in the synthesis of dual-labeled, profluorescent chemical probes, because the structure of a contact quenching construct requires the formation of a ground-state fluorophore-quencher/-fluorophore complex. The ability of such dual-labeled molecular probes to act as intramolecular dimers cannot be predicted. We previously revealed that a mono exo -bicyclo[6.1.0]nonyne ( exo -BCN)-derivatized cystamine framework was critical to synthesizing sensitive, dual-labeled, profluorescent chemical probes capable of contact quenching. Here, we exploited the nonsymmetrical mono - exo -BCN-cystamine backbone by sequentially coupling it with two different carboxyfluorescein (FAM) derivatives and subsequently synthesizing four nonsymmetrical bis -FAM chemical probes. The fluorescence turn-on properties of the bis -FAM chemical probe with the lowest background FAM fluorescence were characterized by kinetic studies. Moreover, the release of two FAM equivalents from the fluorescence turn-on chemical probe during reactions was utilized to develop sensitive assays for measuring the activity and inhibition of two serum biomarkers, butyrylcholinesterase (BChE) and paraoxonase 1 (PON1) lactonase. We also developed an efficient, high-throughput assay for detecting BChE activity based on the chemical probe. Finally, the fluorescence assays successfully quantified the activities of BChE and PON1 lactonase in human serum.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».