In Vitro Reconstitution Studies of RAS-Mediated RAF Activation at the Cell Membrane
Notice bibliographique
Résumé
Activation of the kinase RAF by the small GTPase RAS at the cell membrane is a key regulatory step in the RAS-MAPK (mitogen-activated protein kinase) signalling pathway, which drives cell growth and is frequently dysregulated in human disease, especially cancer. Efforts to target RAF therapeutically have been complicated by limitations in our understanding of the complexity underlying its activation. RAS and the membrane play an essential role in facilitating the transition of RAF from an auto-inhibited monomer to an active dimer, a process which requires concurrent rearrangement of its regulatory binding partner 14-3-3. However, the mechanistic details underlying these conformational changes remain unclear due to a lack of information on the interaction of full-length, 14-3-3-bound RAF with RAS and the membrane. Here, the membrane-bound signalling complex comprising full-length active dimeric BRAF, 14-3-3 and KRAS4B was reconstituted in vitro for the first time using RAS-conjugated nanodiscs, facilitating the study of critical protein-membrane regulatory interactions. This system was leveraged to examine how membrane lipid composition and spatial density of RAS on the membrane impact the binding affinities of monomeric and dimeric BRAF:14-3-3 complexes for membrane-tethered RAS, and to dissect the effects of RAS and the membrane on the activity of BRAF:14-3-3 complexes. Negative stain and cryogenic electron microscopy imaging was furthermore employed to investigate the structural organization of the active dimeric BRAF:14-3-3:KRAS-nanodisc complex. Through using cell-free, defined lipid bilayers, the findings in this thesis offer a unique biophysical perspective on the activation of RAF by RAS at the membrane.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».